dxy_p6vjhl75
菌液20毫升,离心后用500微升重悬,加入上样缓冲液煮样10min,取了40微升上样,第一天跑出来无明显条带,但是在目的条带出有弥散现象,所以第二天取了40微升,离心后吸取上清液20微升重新上样,条带如下图所示
使用15%的预制胶, 电泳时间1H,140V 转膜时间60V,2H mpbs封闭两小时,hPR标记的his抗体孵育一小时,PBST洗膜4次,TMB显色
这两个蛋白之前表达过,但是目前重复六七次,再也没出现过清晰地条带
辛苦大家解答了
balalaLy
有没有可能是你的蛋白表达出了问题?比如诱导表达是不是成功?蛋白表达后是位于哪里?
dxy_p6vjhl75
一个是12kda,一个是16kda
bamboopiggy
你最好取上清测一下蛋白浓度,我感觉是你上样量有问题。
dxy_p6vjhl75
请问上样量会存在什么问题呢?
汤姆卜丽波
有可能是你的蛋白存在降解或者是胶的浓度没选对
dxy_p6vjhl75
蛋白只有10到15kda,所以选择了15%的预制胶
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