在进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景较高，常见原因有哪些？

出现该现象的可能原因有底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了。

加样时没有换枪头造成交叉污染。

氧化后，TMB 形成一种水溶性蓝色反应产物，可以通过分光光度法在 605 nm 处测量。酸化后，反应产物变为黄色，吸光度峰位于 450 nm。 看看你是不是测错了吸光度。

可能是洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。或者是你的底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了。加样时没有换枪头造成交叉污染。

有可能是试剂的原因，建议重复一下试试