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在进行底物TMB溶液显色后,酶标板中的孔有颜色但没有梯度,背景较高,常见原因有哪些?

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junyong151

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4 个回答

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HD8023

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出现该现象的可能原因有底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存,实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长,发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板,特别是洗板时洗涤液的量少加了。

加样时没有换枪头造成交叉污染。

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bamboopiggy

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氧化后,TMB 形成一种水溶性蓝色反应产物,可以通过分光光度法在 605 nm 处测量。酸化后,反应产物变为黄色,吸光度峰位于 450 nm。 看看你是不是测错了吸光度。

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Eason老歌迷

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可能是洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。或者是你的底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存,实验前溶液已经变蓝。孵育温度过高或者孵育时间过长,发生了较强的非特异性吸附。没有按说明书要求洗板,特别是洗板时洗涤液的量少加了。加样时没有换枪头造成交叉污染。

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whilt-shirt

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有可能是试剂的原因,建议重复一下试试

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