好好学习啊吧
想请教一下,我用细胞的过表达模型做的IP实验和野生型做的IP实验有什么区别?师兄说是用野生型也能拉下来互作蛋白,那我构建得过表达模型做有什么意义呢?
转云511
说明你的目的蛋白在野生型的细胞里也有表达,但是表达量很低。过表达的细胞里,目的蛋白表达量多。IP后,可以看到很明显的,过表达的蛋白条带要比野生型的条带粗的多。野生型在这里可作为对照,一个目地是看你的方法对不对,方法对的话,野生型是有条带的,要是没条带,说明IP的步骤有问题;另外一个目地是看,你的过表达细胞是不是目的蛋白真的过表达了,从条带的粗细可以看出来。
bamboopiggy
你用wt的拉的就是内源的,用过表达的,可以算是拉的外源的。内源的只有足够量的时候,才拉下来,外源的能直接拉下来。
Eason老歌迷
我用细胞的过表达模型做的IP实验和野生型做的IP实验是有区别的,野生型它有可能是过表达也有可能是敲低,你可以查看文献,是需要选用过表达质粒还是野生型。
冷泉港蛋白
一、免疫共沉淀研究的几个层次
1. 蛋白a和蛋白b是否存在互作(野生型)
2. 二者的关系,是正调控还是负调控,进行过表达或抑制表达实验。(构建过表达模型)
3. 是直接互作还是间接互作(体外互作验证)
二、原理(见之前的相关讨论)
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