aIraSOG7
做HIF-1α的带GST标签的蛋白纯化,纯化出来的蛋白检测浓度都挺高的,但用考马斯亮蓝检测却没有条带,这是为什么呢,怎么解决?如果有位置大概多少呢?
dxy_yrovq1i9
蛋白太大了,GST不好表达。把GST标签换成His吧,基本可以一把出。
bamboopiggy
你应该是没有表达成功,测到的蛋白浓度可能是一些杂质。GST 26kd, hif1a 93kd合起来大概119kd
aIraSOG7
这样说可能确实 因为hif的wb检测是120左右 所以我就有点迷惑了 跑出来是这样 就是都不对对吗😭😭
冷泉港蛋白
1.分子量=27+92.6=119.6KD 见下图
2.原核系统应该表达不了这么大的蛋白,应该是没有表达成功
3.为什么检测有颜色:可能是你加错样品了
4.如何解决:更换真核表达系统或截断表达
最好把你小样诱导的图片放上去,这样好分析。如果小样诱导没有表达,就不用做大样纯化了。
aIraSOG7
那这种就是不对的吗😭
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