PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢？

aIraSOG7

2022-08-02

做HIF-1α的带GST标签的蛋白纯化，纯化出来的蛋白检测浓度都挺高的，但用考马斯亮蓝检测却没有条带，这是为什么呢，怎么解决？如果有位置大概多少呢？

dxy_yrovq1i9

2022-08-04

有帮助

蛋白太大了，GST不好表达。把GST标签换成His吧，基本可以一把出。

bamboopiggy

2022-08-03

有帮助

你应该是没有表达成功，测到的蛋白浓度可能是一些杂质。GST 26kd, hif1a 93kd合起来大概119kd

aIraSOG7

2022-08-04

这样说可能确实因为hif的wb检测是120左右所以我就有点迷惑了跑出来是这样就是都不对对吗😭😭

冷泉港蛋白

2022-08-03

有帮助

1.分子量=27+92.6=119.6KD 见下图

2.原核系统应该表达不了这么大的蛋白，应该是没有表达成功

3.为什么检测有颜色：可能是你加错样品了

4.如何解决：更换真核表达系统或截断表达

最好把你小样诱导的图片放上去，这样好分析。如果小样诱导没有表达，就不用做大样纯化了。

aIraSOG7

2022-08-04

那这种就是不对的吗😭

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