小布丁瑶瑶
从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带?
多谢多谢!
天雨心晴
首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。
汤姆卜丽波
这个问题可能出现在很多方面,首先提蛋白是否步骤都对,蛋白浓度高不高,然后银染过程中试剂配比对不对,一步一步分析,找原因
inventbiotech
蛋白提取后,有没有测蛋白浓度,跑胶按照20-30ug/孔上样,应该没有问题。蛋白提取觉得有问题可以用柱式法总蛋白提取试一下。
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