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novagen镍柱纯化出现问题

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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医学赶路人

过柱过程中,上样后浅蓝色的柱填料上面渐渐出现一层白色沉淀状物质,同时柱子很堵。Elute buffer洗脱目的蛋白后进行透析,出现黄棕色沉淀!请问有人知道是什么原因吗?

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2 个回答

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汤姆卜丽波

有帮助

柱子是新的么,把柱子按照说明书洗一下试试看会不会出现白色沉淀

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Eason老歌迷

有帮助

锌离子在碱性条件下容易产生白色的沉淀,上样就开始有沉淀那你洗脱后沉淀还在上面的话也许是锌离子,也许是蛋白,所以你可以在同样条件下把样品放置看是不是容易沉淀。透析后产生棕色的沉淀也许是镍离子沉淀,因为在碱性条件下镍离子也容易沉淀,一旦镍离子被DTT还原会出现棕色的沉淀,至于白色沉淀那应该是蛋白本身的沉淀。理论上镍柱如果能抓出锌离子是不会出现沉淀的,所以沉淀还是蛋白本身的可能性更大。

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