ELISA试剂“花板”问题的出现与分析

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作者：肖静 作者单位：850007 西藏拉萨，西藏军区总医院检验科

在使用ELISA试剂进行血液HBsAg、HCV、HIV及梅毒等各项检验的过程中，经常发现空白和阴性、阳性对照以及室内质控孔(卫生部临检中心提供，HBsAg 0.5ng，1ng;HCV、HIV、梅毒均为2NCU)结果正常，而血液标本孔的OD值却比较高(大多数OD值≥0.070)。标本的阳性率很高，每板除对照孔外，有时阳性高达10孔之多，而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。这就是试验中所说的“花板”问题。这种现象对检验结果的正常判断造成了很大的影响。笔者在试验中，针对这种“花板”现象进行了认真的分析及判断。总结如下。

　　1 标本、试剂、仪器

　　1.1 标本 2008年1—12月无偿献血人员的血液标本。

　　1.2 试剂 HBsAg、HCV、HIV、梅毒试剂均为不同厂家的ELISA试剂。

　　1.3 仪器 LD4-2型离心机，BID RAD1575型洗板机，BID RAD550酶标仪。

　　2 方法

　　所有无偿献血人员的血液标本，按照各个厂家提供的ELISA试剂说明书进行HBsAg、HCV、HIV、梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用。

　　3 结果

　　所使用不同厂家的试剂偶尔会出现“花板”问题。

　　4 分析

　　在所有标本进行检测的过程中，所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下，步骤均按照各种试剂说明书的要求去做，排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外，试剂盒内的空白、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常，只有检测的血液标本情况异常。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下，复查后出现“花板”问题的标本基本上仍是阴性。因此，原因可能是在标本的处理，特别是放置时间、离心速度和离心时间及温度方面的问题。所以，标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。

　　为了避免“花板”问题的出现，降低检测的假阳性率，获得更理想的实验结果，首先在选择ELISA试剂时，应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便、省时的试剂。并在检验的过程中应采取下列措施:(1)抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本，选择无添加剂的真空试管，便于离心，得到足够的血清。(2)血液标本应置于室温下1～2h，使血液凝固收缩，然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩，让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至最低。(3)检测之前，加大离心转速，尽量延长时间，使血细胞和纤维蛋白充分沉淀，让血细胞与血清彻底分离。(4)加样时不能加入红细胞或纤维蛋白，要按照操作说明书去做，否则会影响实验结果。(5)封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。(6)手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出，连成整体液面后产生“花板”。 (7)用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。(8)洗液的温度也会影响洗板的干净程度，尤其是冬天温度过低时容易出现“花板”问题。