inventbiotech
从结果来看,封闭应该问题不大,条带这么多,抗体的特异性问题应该最大,这感觉就是抗体没纯化直接上了,导致蛋白从头到尾杂交了全部条带的感觉,猛一看这图还以为是总蛋白银染结果,从抗体角度找吧。
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两个原因,可能是蛋白降解或者抗体浓度太高,特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解,提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度,孵育时间,抗体不好的话需要更换抗体。
李金喜123
1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小
2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作
3)杂蛋白多,建议处理目的蛋白
4)抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体
5)抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间
6)二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物
7)二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度
8)底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间
Eason老歌迷
杂带太多,可能是你的抗体特异性太差。然后你的封闭时间也可以稍微延长。
whilt-shirt
你这个情况有可能是蛋白降解了,不是抗体和操作的原因