转膜后，如何选择抗体，敷抗体的时间怎么把握？

根据你跑的目的蛋白选择一抗，然后二抗的话就根据你选的一抗种属来选择，一抗是鼠的就选抗鼠，一抗是兔的就选抗兔。一抗一般都是4℃孵育过夜。然后二抗常温孵育1.5h，别孵育太久。你可以做几次预实验，调整一下孵育时间，看看什么时间最合适。

一般选择特异性好，已经被验证过的抗体，一抗敷育一般是4℃过夜，12-16h

抗体建议选择大公司的，或者是你的师兄师姐用过的，自己买的一定要做预实验试试。孵育抗体时间，一般一抗是四度过夜的，如果着急也可以室温2h。

一般是一抗4℃冰箱孵育过夜，二抗室温摇床孵育一小时。抗体浓度过高会有杂带，背景也会不干净，抗体浓度过低又发不出条带，还是看个人选择。有条件的话多做几次预实验摸索一下就知道了。