wb黑糊糊一片，是怎么回事呀？湿转，300mA 100min，分子量110kD左右。

除了封闭外，发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好，背景脏或者漆黑一片。

从我个人做wb的经验来说，黑乎乎的潜在原因有1)封闭液封闭一步不够充分。2）洗膜液污染。3)一抗或者二抗的抗原抗体结合的特异性低，可能抗体过期导致。

这种情况有可能是封闭不完全，也有可能是没转上，建议转膜后用丽春红和考马斯蓝染一下看看

没有图啊！要么是你封闭的问题，要么就是你孵抗体的问题，现在夏天了孵二抗时间短一点。

有没有可能是因为蛋白分子量太大，没转过去？

1. 黑糊糊可能是没有封闭好，配制5%的脱脂奶粉封闭，时间1小时以上最好
2. 也可能是抗体浓度过高，可以稀释一下抗体

可能是你的抗体坏了，别的条带呢？别的条带也黑么？

封闭时间再长点，或者抗体特异性不够

用快速封闭液试试，QuickBlock™ Western封闭液

可能浓缩的效果都不是很好，浓缩胶浓度、长度等可以调一下，另外上样量可以少一点。

110的蛋白100min 300ma是不够的，起码要2个半小时往上，但是黑乎乎一片应该不是仅仅是转膜的问题，100min至少有一部分是转过去了的，所以，抗体的问题比较大

出现黑点和黑斑，原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合，解决办法：封闭牛奶一定要纯，封闭结束之后要洗，我们常常是等到要封闭的时候发现没有牛奶，然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置，配的匆忙的时候往往不管是否已经完全溶解。