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丁香通

请问各位大佬,本人构建了x-pET28a的质粒,转到了C43感受态里,在37℃摇起来了,结果加完诱导剂28℃越摇越澄清什么情况?

相关实验:选择重组蛋白表达的合适方法

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dxy_z4nidow0

有同等情况的其他菌株都没有出现澄清问题

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3 个回答

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dxywode

有帮助

尝试低温诱导试试,改变IPTG浓度,还是不行的话,说明你的这个整个序列载体本身就是不表达,得从头进行了。

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bamboopiggy

有帮助

高度怀疑是你的X-pet28a表达x蛋白后,x蛋白有细胞毒性,引起大肠杆菌死亡。

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天一湖医者

有帮助

.1工程菌的问题,可能携带的质粒已经丢失,工程菌不具有抗性,建议在诱导前先检测一下质粒稳定性.

2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效,扩大培养时加入抗生素又过量,建议重新配制抗生素.

3.加入的IPTG浓度过高.

4.培养基的问题,营养不足.

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