慢病毒转染细胞的构建筛选

嘌呤霉素筛的还是比较快的，一般1-2周就可以了。主要看细胞状态。

嘌呤霉素最佳浓度的确定：首先是正常细胞必须全部死亡，其次就是根据各孔细胞死亡情况来确定，一般选择死亡超过50%，细胞生长速度较其它孔不会明显降低。因为细胞死亡少的话可能会有很多低表达量的细胞存在，如果细胞死亡过多，也会导致细胞扩增很慢，不利于快速获得稳定细胞株；

（2）嘌呤霉素的浓度设置，可以去参考文献，根据文献推荐的浓度来进行梯度设置，如果没有文献支持，可以多设置梯度去筛选；

（3）选择了最佳的嘌呤霉素浓度，不代表后面一直用这个浓度，要根据细胞的生长情况来判断，适时的去增减嘌呤霉素的浓度；

（4）细胞长满后尽快扩大培养去检测目的基因的表达情况，检测方法一般是qPCR和WB；

（5）可以根据实验目的选择是否要进行单克隆细胞株的筛选。

通常来说,嘌呤霉素筛选细胞需要大约 48h。