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目的蛋白没有条带是什么原因?

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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刹那芳华2333

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6 个回答

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Topmicro

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目的蛋白没有条带的原因有很多,比如目的蛋白没有表达或者表达之后又降解了。

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cfzhao123

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原因有很多,需要考虑膜上抗原量少,蛋白质制备过程中表位丢失,一抗敏感度低,或二抗使用不合适等等

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bamboopiggy

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1.位置切错了2抗体不好使3蛋白降解

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异乡人hyq

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建议首先要确定以下几个基本问题:

1.目的细胞是否表达这种蛋白?丰度如何?

2.提取蛋白的细胞裂解液是否加入了蛋白酶抑制剂?对于磷酸化蛋白是否还加入了磷酸酶抑制剂?防止蛋白降解。

3.是否按照CST建议的操作方法进行实验?

4.刺激处理是否恰当?

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未来9

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如果目标蛋白没有条带,周围有背景可能是你的一抗浓度较高,二抗上HRP催化活力太强,同时你的显色底物处于一个临界点,反应时间不长,将周围底物催化完,形成了空白即“反亮现象”。将一抗和二抗浓度降低,或更换新进口的显色底物。

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天一湖医者

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这个因素有很多了,比如说样品浓度、孵育温度、抗体性质呀等等。

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