植物蛋白质的提取方法及注意事项？

1、将组织称重，减去EP管重量，研磨一定要充分

2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时

3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上

4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管

5、离心，12000转，4℃，30分钟

6、取上清至新的预冷的EP管

7、BCA定量

8、放入—80℃

最常见的方法有碱溶酸沉法、酶提取法、有机溶剂提取法、盐溶提取法、反胶束萃取法等。

注意事项:1.尽可能提取完全或降低样本复杂度，只集中提取目的蛋白；

2.保持蛋白处于溶解状态（通过裂解液的pH盐浓度，表面活性剂，还原剂等的选择）；

3.提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）；

4.尽量除去核酸、多糖、脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）；

5.样品分装，长期于-80℃保存，避免反复冻融。

• 植物蛋白质的提取方法基本上有这几种：盐析法、有机溶剂法和等电点法。
• 注意事项
• 1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。
  2、不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。
  3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。
  4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。
  5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。
  6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。
  7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT（二硫苏糖醇）(或β-巯基乙醇），防止蛋白质的氧化。
  8、加1~10mmol/LEDTA金属螯合剂，防止重金属对目标蛋白的破坏。
  9、使用灭菌溶液，防止微生物生长。