蛋白质纯化实验过程中，标签包涵体蛋白易洗脱，怎么解决这个问题？

原核蛋白表达纯化是很容易形成包涵体的，在现阶段可以采用俩种手段，一是预防，二是复性。预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前，对表达环境进行优化的一些手段，来降低重组蛋白合成的速率。例如：密码子优化，表达温的选择，与分子伴侣或折叠酶共表达等等；而蛋白质的复性则是指：在变性条件不剧烈，变性蛋白质内部结构变化不大回时，除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其答天然构象和生物活性的方法。

蛋白都是包涵体，这种情况最好先优化一下诱导条件，把诱导温度降下来，甚至可以16度诱导过夜，看看能不能提高蛋白的可溶性。

1.离子交换每个梯度都洗下来目标蛋白，最大可能性是上样量过大，流速太大，建议增加清洗的体积数，减少上样量，降低上样速度。

2.上样完洗脱前，清洗的不彻底。

3.标签没有表达出来：可能是因为折叠构象不正确导致标签在重折叠时没有位于蛋白质分子的表面上无法与离子柱结合。or标签在折叠时没有位于蛋白质分子的表面上。or填料有问题，换填料。

4.PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液pH、离子强度相同。

可能从以下情况排除并予以解决：

1. 蛋白质的折叠形态发生了改变隐藏了标签，而使得蛋白质无法挂柱。
   • 因临近的空间的一个或多个氨基酸的空间位阻阻碍了标签与离子柱形成共价键。
   • 环境影响：pH，离子强度，其他蛋白质分子，缓冲溶液类型，有关影响蛋白质分子表面的试剂等。增加所提的蛋白质样品的溶解度或还可以加大离子型、非离子型或两性离子表面活性剂的浓度或类型。
2. 柱子没平衡好，平衡缓冲液没加咪唑，平衡液PH不适合，缓冲液pH要与蛋白质pI差1-2。
3. 有比邻的组氨酸的污染蛋白质与离子柱结合，通过降低洗脱液pH值使得标签质子化而使得污染蛋白质从层析住上被洗脱。
4. 一些蛋白质或DNA与带有标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用，可以用低浓度的去污剂（2%的Triton X-100或浓度不大于0.5%SDS)洗涤样品（上样洗脱时）或增加洗脱液的盐浓度（氯化钠溶液低于2mol/L）。
5. 填料有问题，换填料。
6. 最后可以考虑一下试剂的问题。