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目的蛋白15KD左右,一直没跑出来,内参β-actin一直都有,转膜试过衡流220 40min,也试过20V 15min

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dooling123

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4 个回答

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小熊纯一郎

有帮助

百分之15的胶,不用跑到底,15的条带位置分开就行,转膜用0.22微米的膜,转40分钟左右,跑胶时可以把那个机器泡冰水里,降低电泳液温度,转膜时转膜液预冷。增加蛋白上样量,增加一抗浓度,或者换别的品牌的一抗。

我觉得主要问题在于一抗,我们实验室0.45的膜,0.22的膜,pvdf膜,nc膜,还有转膜时间少到40min或者多到2小时,是都可以将小分子跑出来的。

我的第一建议是换一抗,或者加一抗浓度。

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府宅

有帮助

可以改变条件为4℃ 15V 转膜过夜

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bamboopiggy

有帮助

1.用15%的胶,2.转膜的时候。看15附近的marker过去了么,一般300mA,2h没问题的。

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未来9

有帮助

目标蛋白很小,尽量选择0.2μm的膜,缩短转移时间;也可将两张膜叠在一起再电转。

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