目的蛋白15KD左右，一直没跑出来，内参β-actin一直都有，转膜试过衡流220 40min，也试过20V 15min

百分之15的胶，不用跑到底，15的条带位置分开就行，转膜用0.22微米的膜，转40分钟左右，跑胶时可以把那个机器泡冰水里，降低电泳液温度，转膜时转膜液预冷。增加蛋白上样量，增加一抗浓度，或者换别的品牌的一抗。

我觉得主要问题在于一抗，我们实验室0.45的膜，0.22的膜，pvdf膜，nc膜，还有转膜时间少到40min或者多到2小时，是都可以将小分子跑出来的。

我的第一建议是换一抗，或者加一抗浓度。

可以改变条件为4℃ 15V 转膜过夜

1.用15%的胶，2.转膜的时候。看15附近的marker过去了么，一般300mA，2h没问题的。

目标蛋白很小，尽量选择0.2μm的膜，缩短转移时间；也可将两张膜叠在一起再电转。