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请问大分子目的蛋白,本底表达低,每次跑出来都只能看见maker,目的条带都很若,有什么解决的办法嘛?

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镜头下DC

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6 个回答

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迟C迟

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推荐使用Tris-Acetate 凝胶跑大分子蛋白,会呈现更高的分辨率。凝胶浓度与孔径成反比,即凝胶浓度越小,孔越大,较大分子量的蛋白质更容易通过,所以建议使用6-8%浓度的分离胶,当然也可以使用梯度凝胶。

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dxy_yjs8h877

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第一,表达量少的话可以适当加大提取蛋白的组织用量,加大样品的上样量呀

第二,实在不行你可以分开曝膜,一起跑但是曝膜的时候把marker和样品切开,这样不会被marker影响到样品的曝光。

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whilt-shirt

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增加上样量,增加转膜时间和电流

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bamboopiggy

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要么增大上样量,要么增大一抗浓度。或者稍微增加一下转膜时间,这个需要你自己摸一下

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vae1476

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有卖专门适合用于大分子量的预制胶,缺点是比较贵,优点在于效果会比较好,另外,延长转膜时间,换大孔径的膜

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未来9

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可以加大抗原上样量。这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。

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