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酵母菌因为rna含量较多,dna含量少,所以一般用稀减法提取,细菌的一般和细胞一样,用酚氯仿抽提就可以了。
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酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.516%),而且菌体容易收集,RNA 也易于分离,所以更容易。
1.提取
活性干酵母粉5g,倒入100mL 三角瓶中,加NaCl 5g,水50mL,搅拌均匀,置于沸水浴中提取1h。
2.分离
将上述提取液取出,立即用自来水冷却,装入大 离心管 内,以3 500r/min 离心10min,使提取液与菌体残渣等分离。
3.沉淀RNA
将离心得到的上清液倾于50mL 烧杯中,并置于放有冰块的250mL 烧杯中冷却,待冷至10℃以下时,用6mol/L HCl 小心地调节pH 至2.0~2.5。随着pH 下降,溶液中白色沉淀逐渐增加,到等电点时沉淀量最多(注意严格控制pH)。调好后继续于冰水中静置10min,使沉淀充分,颗粒变大。
4.抽滤和洗涤
上述悬浮液以3 000r/min 离心10min,得到RNA 沉淀。将沉淀物放在10mL 小烧杯内,用95%的乙醇5~10mL 充分搅拌洗涤,然后在铺有已称重滤纸的布氏漏斗上用 真空泵 抽气过滤,再用95%乙醇5~10mL 淋洗3 次。由于RNA 不溶于乙醇,洗涤不仅可脱水,使沉淀物疏松,便于过滤、干燥,而且可除去可溶性的脂类及色素等杂质,提高了制品的纯度。
5.干燥
从布氏漏斗上取下有沉淀物的滤纸,放在8cm 表面皿上,置于80℃烘箱内干燥。将干燥后的RNA 制品称重。
6.含量测定
称取一定量干燥后的RNA 产品配制成浓度为10~50μg/mL 的溶液,在751 型 分光光度计 上测定其260nm 处的光密度值。
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差别是破坏细胞壁的方法不同。二者的不同之处就是原核细胞与真核细胞的不同之处:主要是细胞核有没有核膜包被;细胞器种类和数量的多少(原核细胞只有核糖体这一种细胞器)。
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