WB实验，同一个样品，上样体积都一样，但在不同的孔上样，显影后，每个孔的灰度值却不一样。最左边的孔显影出来的灰度值总是最浅的。

转膜效率不一致，可以更换海绵和滤纸，同时将胶和膜尽可能的放正中间；

或者孵育一抗或二抗时膜的一端有翘起来或者贴在孵育盒上了，导致抗体孵育不充分，从而导致边上条带偏淡。

上样量太高有可能导致过曝,灰度值分析误差大。

可能是转膜没转好，也可能是发光液没加均匀

可能是你转膜夹子没夹好，转膜效率不一样，换个夹子，或者是多放一层滤纸试试