蛋白纯化常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象，怎么解决？

首先我们要知道包涵体形成是因为外源性重组蛋白在高表达时，由于蛋白折叠辅助因子不足，在蛋白折叠之前分子间连接的疏水表面暴露在外面，导致折叠中间体大量堆积，并且这些中间体对蛋白酶的降解有抑制作用；对于大量折叠错误蛋白的出现，重组细菌体内缺乏相应的反应机制来恢复蛋白的正确折叠；促进细胞表达的蛋白多肽的溶解和正确折叠功能的丧失；蛋白或多肽自身结构在热力学和动力学上失衡；一些环境因素(如高温、酸性介质)能明显刺激包涵体的形成，因此控制介质组成成分、培养基和基因表达条件也可以减少包涵体的形成；一般，含硫氨基酸越多越易形成包涵体，脯氨酸含量明显与包涵体的形成呈正相关，因此，通过改变重组蛋白连接区的氨基酸序列可以减少包涵体的形成。

使用中等强度或弱的启动子，低温培养，有限的诱导，优化培养基条件，进行融合表达，

　　与伴侣分子和折叠酶共表达，表达定位于不同的空间，选择突变的菌株或其他的原核表达系统。

1. 降低重组菌的生长温度，降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法，较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用，从而可减少包涵体的形成。

　　2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂，培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应，在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输，其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇（诱导热休克蛋白的表达）、低分子量的巯基或二硫化合物（影响细胞周质的还原态，从而影响二硫键的形成）和NaCl。

　　3. 供给丰富的培养基，创造最佳培养条件，如供氧、pH等。

将包涵体蛋白溶解完全以后，然后将蛋白再复性，就可以研究表达蛋白的活性及构象了