如何防止组织样本wb蛋白提取时候降解？

1、使用蛋白酶抑制剂抑制细胞或组织中释放的蛋白酶活性。PMSF是廉价但高效的抑制剂，因此几乎是所有WB实验中必选之抑制剂。

2、提取蛋白时，避开蛋白酶的最适活性温度。所有的步骤都可在低温下完成，所有的试剂都需预冷，以降低蛋白酶活性，防止蛋白降解。尤其是消化系统相关的组织样品尽量取新鲜的样品制备，制备方法选用液氮研磨的方法，将样品降解降到最低。

3、加快提取速度。对于组织来说，取样顺序最先取消化系统相关的组织（如胃、大小肠、肝脏、胰腺等）和富含巨噬细胞的组织（如肺)，然后取生殖相关的组织（如卵巢、子宫、睾丸等），最后取心、脾、肾、脑等器官。取下的组织冻存在液氮或-80度冰箱里。少数细胞系，如Raw 264.7、U-937等，也含较多蛋白酶，在提取时也需要快速提取。

在提取时应保持低温状态并加入对应的蛋白酶抑制剂

蛋白样本建议加入上样缓冲液煮沸变性后保存，对于稀有样本建议-80℃分装保存，并且避免反复冻存，尽快完成实验

无需考虑蛋白降解问题，只是在提取时候保持低温，并在裂解中加入pmsf就可以了

1.注意低温，冰上放置。2.可以在lysis里面加入磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。