如何提高蛋白质提纯效率？

采用进口的专用试剂盒会提高提纯率

细胞培养状态要好，用lysis溶解细胞细胞全程要在冰上操作，可以适当延长溶解时间。

提高蛋白提纯效率的方法：

1、电泳

不仅是分离蛋白质混合物和鉴定蛋白质纯度的重要手段，而且也是研究蛋白质性质很有用的方法。等电聚焦分辨率很高，pI有0.02pH的差异就能分开。2D-PAGE分离蛋白质分辨率已经发展到100000个蛋白点。

2、离子交换层析

改变蛋白质混合物溶液中的盐离子强度、pH和（阴、阳）离子交换填料，不同蛋白质对不同的离子交换填料的吸附容量不同，蛋白质因吸附容量不同或不被吸附而分离。

可以用以下方法提高效率：

1、透析和超滤

透析在纯化中极为常用，可去除盐类（脱盐及置换缓冲液）、有机溶剂、低分子量抑制剂等。超滤一般用于浓缩和脱色。

2、离心分离置换缓冲液

许多酶富集于某一细胞器内，匀浆后离心得到某一亚细胞成分，使酶富集10-20倍，再对特定的酶进行纯化。 差速离心，分辨率较低，仅适用于粗提或浓缩。速率区带法，如离心时间太长所有的物质都会沉淀下来，故需选择最佳分离时间，可得到相当纯的亚细胞成分用于进一步纯化，避免了差速离心中大小组分一起沉淀的问题，但容量较小，只能用于少量制备。等密度梯度离心常用的介质有蔗糖、聚蔗糖、氯化铯、溴化钾、碘化钠等。

3、凝胶过滤

这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一，注意使要分离的蛋白质分子量落在凝胶的工作范围内。选择不同的分子量凝胶可用于脱盐、置换缓冲液及利用分子量的差异除去热源。

样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。