为什么转膜之后用TBST越洗越淡？

我觉得你如果用TBST洗5miundefined3次，封闭敷抗体，密闭室温改为2小时去试试。

可能是封闭液重复使用已污染了。

在转膜之后先用丽春红染下看看蛋白是否完全转上，另外考虑转膜液和转膜滤纸是否有问题，建议更换新的转膜液和滤纸试试。

这个是强清洗剂，洗得多了会洗掉蛋白，要是所有条带都变浅了，但组间比较有差异就行了。

封闭后一般都要用TBST洗3次，但一定要TBS再洗一次后加一抗。