兀自前行
1:细胞膜提取有反复冻融法和低渗法,哪种方法更好?请分析一下各自优缺点
2:破碎细胞所使用的细胞破碎仪会产生大量热量,这对细胞膜伤害有多大?
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1.对于水溶性的细胞膜蛋白,可以采用反复冻融的方法,但是对于疏水蛋白就需要用到去垢剂,所以如果方便最好还是用低渗的方法提取,因为里面直接加了去垢剂。
2.细胞破碎仪是会产热,但是你可以将你样本管放在冰水浴中,然后再用破碎仪震破细胞,这样基本不会影响蛋白。
以上两种意见如果不放心,最好先做一个预实验,试一下,那种方式对你来说合适。
府宅
1. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
2. 反复冻融法
生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 细胞破碎仪:使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
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(1) 方法一:用滴管取猪(或牛、羊、人) 的新鲜的红细胞稀释液(血液中加适量的 生理盐水),滴一小滴在载玻片上,盖上盖 玻片,制成临时装片。
在高倍镜下观察,然 后在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水,同时在 另一侧用吸水纸小心吸水,并且持续观察 细胞的变化:可看到近水的部分红细胞发 生变化,凹陷消失,细胞体积增大,很快细 胞破裂,内容物流出。
(2) 方法二:向猪(或牛、羊、人)的新。 鲜血液中加入柠檬酸钠,然后进行离心 或者沉淀,得到红细胞稀释液,再取适量 的红细胞稀释液,加入蒸馏水,倒入离心 管内,用一定转速的离心机离心,沉淀于 离心管底部的就是较纯的细胞膜。