多肽浓度会比蛋白浓度还要高的原因？

16 个回答

JCorona

2022-01-21

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原因：1.蛋白质具有三级结构，许多折叠、卷曲的部位往往无法被检测到，造成检测值偏低，酶解后许多被隐藏的信号释放到表面，检测值趋近于真实值；2.酶本身也是蛋白质，若是酶的添加量过多，则酶会催化自身水解，造成多肽量增多

医往情深丁香园

2022-01-21

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这时候要考虑是不是样品有问题了，如果超过的不是很多，其实也正常。

内科小护士

2022-01-21

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是否自己酶解时加的酶过饱和，当完全切开目的蛋白后，加入的蛋白酶过量，然后去测吸收值时，蛋白酶也会有吸收峰。

红格子一号

2022-01-21

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检测原理不一样啊，多肽侧链全部暴露。会高一些

jey1235

2022-01-21

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要明白一个道理，蛋白在保持结构的过程中会有疏水面折叠在内部，实际检测的信号就是surface信号。但是peptide就不一样了，基本不具有三级结构，所以侧链全部暴露。当然你测到的浓度会高于来源的蛋白了。这是正常的。理想情况下上二者的质量不会有变化。不需要担心

ZZDX-YILILI

2022-01-21

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我理解的是，二者真正的检测原理不一样，蛋白质是利用碱性条件下，铜离子熬和成复合物，在562下检测吸光值。蛋白检测多肽是根据肽键的吸光值来检查的。

dxy_bq4uxnd

2022-01-21

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多肽浓度比蛋白浓度大应该是正常的吧，更多氨基酸被暴露出来后，检测浓度是会有增长的。

verbalkint

2022-01-20

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过夜酶解加的那个酶，给它降解了吗？没有的话它也是蛋白啊，会被检测到的，总的蛋白浓度当然上去了

dxy_h7vcp8v3

2022-01-20

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肽含量酶解后变高。。首先检查，是否自己酶解时加的酶过饱和，当完全切开目的蛋白后，加入的蛋白酶过量，然后去测吸收值时，蛋白酶也会有吸收峰。建议，确定酶解时切割酶的效率，不宜加过饱和。其次，可能自己第一次测蛋白质含量的时候，没有完全混匀取样，没有测得真实浓度，而第二次测多肽测的了真实浓度，所以导致了偏差。最后，建议多种方法测量，可以使用Nano，最后对比。

dxy_pni5ki46

2022-01-20

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不知道用的试剂盒是不是bca，如果是bca的话多肽的检测值是很高的。我们之前做bca的话多肽检测的蛋白含量都超级高，可能是由于bca法是蛋白质还原二价铜，我们推测是酶解成多肽后还原性大大增强了

Guoood

2022-01-20

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你用的是什么酶去水解呢？需要除外蛋白水解酶是否有杂质，也可能会影响到水解后多肽的浓度。

bamboopiggy

2022-01-20

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你蛋白定量用的是什么试剂盒？还是直接nanodrop 280nm测？如果是用nanodrop就会存在你的蛋白含不含色氨酸、酪氨酸等具有苯环结构的氨基酸残基，如果含则苯环结构则在280nm处有高吸收峰，蛋白含量会高。如果不含，则无法检测的含量就低。然后你再用不同的方法去测多肽，测出来的量就可能比蛋白的含量高。