条带宽度不一样目标蛋白性状奇怪并且拖尾严重的原因
丁香实验
1、BAX
2、β-actin
这个是我的肝脏组织，上样量10微，不知道是样品裂解的问题还是上样量太多呀，想请大神们帮忙看看，万分感谢。
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35 个回答
dxyhsx123
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上样的孔径是否均一，浓缩胶和分离胶比例是否合适，是否混匀，有无气泡，跑胶电压和速度等方面调整。
dxy_9kptsiw
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转膜不稳定
胶没配好
转膜液需要更新
上样浓度过高
lzy必有我师
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目的蛋白明显有降解，蛋白酶抑制剂多加一点，煮样时间不要太久，另一方面拖尾也很可能是因为样品裂解不充分，蛋白提的有问题，此外大蛋白wb建议低电压跑胶和转膜
JCorona
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可能的原因：
1.自制胶质量问题
2.肝脏组织蛋白酶种类多且含量高，可能导致蛋白水解
3.封闭不完全，出现非特异条带
4.抗体存在非特异结合问题
5.浓缩时电压过大，或者浓缩胶宽度不够，导致样品没有压齐
6.抗体清洗不彻底
于小闹0808
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蛋白有降解，还有一个很大的可能就是一抗浓度太高
是小杨同学
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我觉得可能是一个你封闭没有做好，没有封闭完全，再一个是浓度不太够，导致的拖尾
dxy_w4oj7yoe
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一方面你的目的蛋白明显有降解，蛋白酶抑制剂多加一点，煮样时间不要太久，另一方面拖尾也很可能是因为样品裂解不充分，蛋白提的有问题，此外大蛋白wb建议低电压跑胶和转膜
医往情深丁香园
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我觉得出现拖尾的原因可能是一抗浓度太高，导致抗体非特异性结合，或者是由于洗膜的时间和次数不够，导致其他蛋白没有洗干净。
内科小护士
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封闭物用量不足，封闭物使用不当，封闭时间不够，一抗稀释度不适宜，这几个原因都有可能。
ZZDX-YILILI
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原因如下:1.没有封闭好。2.抗体特异性不是很好。3.实验过程中避免外力造成膜损伤。
dxy_rlratyf3
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条带模糊不清拖尾严重可能是因为一抗浓度过高，蛋白作用时间太长，且样品中可能有蛋白酶残留，使蛋白裂解，造成模糊条带或者条带消失，当然也不排除加样时部分样品漏出。也有部分well拖尾可能因为蛋白量过大。
bamboopiggy
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1.感觉蛋白有一些降解，但是问题不太大。你8号泳道上样量有点大，所以才成一坨。2.比较简单的方法是将需要裂解的肝脏称重，加等量裂解液裂解，最后按照重量，将终浓度，调节为1mg:100ul，然后取10-15ul上样。即可
dxy_pggo2lp2
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1.上样量10μg不算多，反而有点少
2.可以从一下几个方面考虑
a.膜的正反，显影时是膜的正面吗？
b.抗体的孵育，考虑抗体品牌（抗体的纯度是否合格），孵育时是否摇床孵育，有没有气泡
c.WB胶的质量，如果是自己做的胶看看有没有裂缝，裂缝可能导致拖尾。
d.更换一套新的电极设备
一支肾上腺素
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这种情况很容易出现，因为导致条带拖尾的原因很多，可能性较大的是一抗浓度太高，作用时间太长或蛋白量过大。
解决办法根据情况调整蛋白量，同时降低一抗的浓度，缩短一抗的时间。
水深先试浅
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可能的问题在：1.样品的问题，提的蛋白有问题 2.一抗的质量问题，或者是多克隆抗体 3.封闭没有封好，延长封闭时间 4.上层胶太少了，蛋白没有浓缩好
dxy_pni5ki46
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看actin的带感觉上样浓度应该没有过量，不过不知道上的是10ul还是10ug，条带粗细不一样可能是体积上的不一样导致的。条带背景有点杂我之前做肝脏样品的时候有时候也遇到这种的结果，我觉得有可能是肝脏背景比较复杂，脂肪以及代谢物比较多可能有些影响。除了肝脏我做肾脏的时候也遇到这样，条带拖尾到图片实在用不了，用超滤管超滤，缓冲液洗两遍后可以解决。
jey1235
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提几点建议：
1、组织样品务必处理干净（减少来源量，有条件要匀浆处理，然后高速离心，取上清制样）
2、一般组织样品要比细胞样品粘度更大，上样控制体积。（换好一点的loading buffer，SDS-PAGE 有条件要换梯度胶，然后低压跑）
3、感觉抗体的效果也很一般，考虑增加稀释比例或换用抗体。
Guoood
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样品降解是其中一个原因，建议新鲜提取样品分装成小管，避免反复冻融。看图片的话，还可能是膜封闭不够到位或抗体不够特异，可延长封闭时间，配一管新抗体试试。
zxb597
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上样量过多，浓缩胶的长度不够， 分离胶浓度偏低，跑胶电压过高，检查转膜时有无带动凝胶和膜的相对位移因素，显影时间过长。
大番茄abcde
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这个原因太多了，目的蛋白跑成这个样子，有可能是在⑴刚开始配胶的时候就配的不均匀，导致跑的歪七扭八，②拔梳子的时候是否把梳子拔歪导致孔径不一样大，③抗体是不是用的次数大多了，灵敏度降低，④从图片上来看，背景颜色也比较深，可能封闭液用的次数太多了，⑤目的蛋白和内参都不太深，是否蛋白本身降解了，⑥是否胶还没完全凝好，就开始上样，导致条带跑的比较乱，⑦从图片来看，内参有两条，可能是蛋白降解或者是抗体的原因，抗体浓度太低或者和其他抗体是否掺了，⑧电泳液是否已经粘稠了再加上跑的电压比较高等等都会导致最后跑出来的不太好看，楼主加油＾０＾~
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