显色弱灵敏度低？

在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因： 产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。 试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。 洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。 孵育时间和孵育温度未达到实验要求。 洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。 底物溶液TMB显色时间太短。