WB 实验跑胶条带怎么变成横竖交错了？

tao0129

2013-02-25

western 第一步跑胶，用的 15％分离胶，5％浓缩胶，每孔点样蛋白 30微克，用恒流 80mA 跑胶，怎么 Marker 跑的很好，是横的，蛋白却横的也有条带，竖的也有条带。我师妹刚刚做过的蛋白用的和我一样的条件，在同一台机子上面跑，原来跑的很好的，怎么现在我跑就不行了 QAQ

1 个回答

小坏2012

2013-02-25

有帮助

可能的原因：1、样品煮沸十分钟后，要离心（12000rpm；10分钟或者更长时间）2、上样的时候注意不要吸入底部的沉淀；如果是以前处理的样品，再次上样前，也要从新离心。3、上样量太大，可以减半或更少。4、电流过大，尤其是样品通过分离胶的时候，最好不要超过40 mA。<5、电泳缓冲液成分或者浓度有问题。6、配胶的液体有问题，尤其是tris盐酸可能性最大。7. 应该简少蛋白质的量：厚胶50~80 ug 薄胶20~30 ug。8. 学弟也有一次有这现象，就是在添加溶剂时浓度配制错误。9. 样品的蛋白如果放置过久，也会有这种现象(通常较少见)。