我最近做western的内参条带特别好，背景也很干净，但是目标蛋白要么没有条带，要么有条带但是背景很脏，为啥呢？

我最近做western的内参条带特别好，背景也很干净，但是目标蛋白要么没有条带，要么有条带但是背景很脏，请帮忙分析下原因呗，谢谢！条件：8%的胶，上样量40-100ug，浓缩胶80V，分离胶100V。半干转转膜15v，20min，或者湿转0.29A 1.5h，5%脱脂奶粉室温封闭1h，一抗SREBP (125/68kda)，MDM2(90/60kda)：（santa，1:100）4度过夜，TBST洗3次，每次10min。二抗（abcam1:5000 或者 cst1:2000）室温孵育一小时，TBST洗3次，每次10min。我有的时候每次洗20min，洗3次，但是背景依然很深，有的地方黑黑的一团。我不知道怎么发图片，希望我的描述够清楚。