做分子量270的蛋白电泳和转膜什么条件比较合适？

如果我做分子量270的蛋白电泳和转膜什么条件比较合适？还有，最近几次做WESTERN BLOT 发光都是这样的，以前没遇见过（其他条件都没变，很碰巧刚换了一种PVDF膜就这样了），请问是膜的原因还是？换膜了，这种情况有所改善。