我的WB条带出现在它不应该出现的地方怎么办？

赵栋2012

2013-02-25

我是做western blot 的新手，迫切的想知道从人组织中提取IL-6的western blot 跑出的带子应该出现在什么地方，它是糖蛋白，分子量大概是26kD,是不是就应该在26kD处？可我做了很多次（至少15次），在26KD处没有带，但每次都在60处有很明显的带，这是为什么？我现在很着急，不知道该如何办？

2 个回答

paradisekisschen

2018-12-19

有帮助

糖基修饰作用？

赵栋2012

2013-02-25

有帮助

qingshi战友回答：我想你可以从几下方面考虑： 1. 从组织中提取的蛋白春不纯，用什么方法抽提，抽提完了后，PAGE的结果怎么样？ 2. 如果PAGE结果明显，而WESTERN无信号，你应该考虑两点：60KD左右的物质可能是什么，抽提过程中自带的，还是il-6形成DIMER？第二复核你用的抗体 3. 一定要跑变性不连续电泳，CHECK你用的LOADING BUFFER。 4. 换用标准品的IL-6，作阳性标准对照！没法子了，只好掏腰包了！