为什么 Western Blot 的条带向两边扩散？
歪歪不倒翁
我是western初学者，最近做试验总是出现加样后样品不浓缩，向两边扩散的现象，我的缓冲液和配胶的试剂应该都是没问题的，因为有个师姐同时做没出现这个情况，请教一下，万分感谢
13 个回答
fastboy1122
有帮助2
建议初学者，购买固定公司的凝胶试剂盒和上样缓冲液，自己配置的有时候会出现比例不对，导致后续实验失败，你们目的是完成实验得到结果，虽然试剂盒贵了点，但是一般不会出问题，而且同批次的比较稳定，先完成实验得到结果，再回头研究为什么，这样两不误，实际上制造样本的价值远远高于试剂盒多出来的那些钱！我没说错吧！
lzp126
有帮助9
样品向两边扩散是因为在电压作用下蛋白向下跑 自身阻力导致样品上面和下面受力不均 样品孔旁边是空的话就会倾向于从旁边阻力小的孔扩散 跑胶时在样品两边的空孔加上等量的上样缓冲液就行了
银城街7号
有帮助1
如果严格按照配方配置凝胶，那么胶也许没有问题，是否可以考虑下将上样量减少或是增加上样孔间的距离，比如隔一个上样孔加一组样品。
liannianyouyu82
有帮助1
1. 确定胶凝固良好，夏天这个时候的室温，凝胶时间最好不要少于30min，如果实验室开着空调，或者放在烤箱里凝胶，凝胶时间根据情况还需调整。2. AP 是否新鲜。3. 配胶的比例。4. 重复一次再看看。祝好运。
熊雪婷
有帮助1
同意楼上，一般样品乱跑或者跑的不好看都和胶有关，确认的配胶的配方是正确的，可能有一个成分未加或者失效了。
栀子茉年
有帮助1
如果蛋白样处理的没有问题，最大的可能是胶的问题，师姐有没问题，说明配胶的每一种试剂没问题，可能是在配胶过程中比例无意中错误，或者没有凝好，都是可能的。
momimimimomi
有帮助1
1蛋白样本上样前是否已加热100℃，10min，使蛋白质变性。
2配制分离胶和浓缩胶的配方是否弄混了，等胶凝聚的时间稍长一下，保证胶聚合完全。
3电泳液是否配制正确。
4加样前要将电泳液没过上样孔，保证上样孔内全部充满电泳液，內液面高于电泳槽外液面。
5确认没有接反正负极。
2配制分离胶和浓缩胶的配方是否弄混了，等胶凝聚的时间稍长一下，保证胶聚合完全。
3电泳液是否配制正确。
4加样前要将电泳液没过上样孔，保证上样孔内全部充满电泳液，內液面高于电泳槽外液面。
5确认没有接反正负极。
milkmoon
有帮助1
把胶孔冲干净，甘油的量不知道是不是也有问题？
hustdoctorhorse
有帮助3
凝胶的质量非常重要，聚合收缩时间是否够？各组分是否充分混匀？
liangning1123
有帮助3
是不是配浓缩胶的时候混匀不均匀，以前出现过这个问题，混匀后就解决了。
ＮＯＮＮＩＥ
有帮助1
你是否把tris（ph6.8)和ph(8.8)加错了呢？
bellefire1
有帮助1
同意楼上，首先考虑胶的问题，配胶试剂已经比较成熟了，一般不会出太大问题，把步骤仔细恢复一遍，看有没有与你师姐不同的地方，
larixa
有帮助12
你的胶是失败的，胶的比例有无问题，微波炉加热是否充分，趁热倒胶时是否均匀，冷却凝结时是否静置，冷却时间是否足够。都可能出现小问题。从你的叙述来看，你的胶可能不止一处存在问题。
先不要浪费你的样品，先研究一下怎样做出能用的凝胶。
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