RNA scope染不出目标探针，不知道怎么回事

亮婆婆

2023-08-09

DRG组织做了RNA scope，染不出目标探针，图1阳性对照探针，图2是阴性对照探针，图3是目标探针。目标探针没什么阳性信号。目标基因q-PCR跑出来CT25左右。wb和IF也能做出来。但怕IF抗体特异性不好买了scope，结果根本染不出来，不知道哪里出问题了

huarenqiang5

2023-08-10

有帮助

由于样本本身制备过程中未按照标准流程，固定不充分，导致RNA大幅度降解，故无法检测到靶探针信号。

毛利小五郎的徒弟

2023-08-09

有帮助

考虑是rna降解的可能性高，降解了所以看不到染色

高山云初

2023-08-09

有帮助

1.样本处理问题:样本处理过程中可能存在破坏RNA分子的情况,如过度切片或超声波破碎等。此外,如果样本冷冻或固定的时间太久,也可能导致RNA分子的降解。

2.RNAscope实验操作问题:实验过程中可能存在RNA适配体和探针的浓度不足、杂交温度或时间不当等问题。

另外,使用的探针可能不够特异性,也可能导致信号不明显。

3.仪器问题:如果使用的显微镜或成像系统设置不当,也可能导致信号不清晰或无法观察到。