【求助】RNA剪接，蛋白仍有表达怎么回事？
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我在建立过表达细胞模型的时候，重组质粒构建好经测序是完整的目的基因，可是转到靶细胞，RT-PCR产物经测
序少了86个碱基，我考虑是RNA剪接，可做western blot验证却有目的条带，且明显过表达了，我想问下大家有见过这
种情况吗，我觉得基因水平都少了，怎么蛋白还有表达呢，请高手们指点迷津。谢谢！
序少了86个碱基，我考虑是RNA剪接，可做western blot验证却有目的条带，且明显过表达了，我想问下大家有见过这
种情况吗，我觉得基因水平都少了，怎么蛋白还有表达呢，请高手们指点迷津。谢谢！
怎么都没人理我呢，自己顶下吧
这种情况只能说明你的载体的问题？RT-PCR产物经测序少了86个碱基，这能说明什么吗？一般的载体不会像体内的基因组以及mRNA一样会受到很多调控的。所以建议你质粒重新测序。
zhujoker wrote:
这种情况只能说明你的载体的问题？RT-PCR产物经测序少了86个碱基，这能说明什么吗？一般的载体不会像体内的基因组以及mRNA一样会受到很多调控的。所以建议你质粒重新测序。
是的，重组质粒一般是不会进行RNA剪切的，因为其是通过cDNA反转录过来的，没有intron。
谢谢上面各位的解答，可是我那个重组质粒测过好几次序列了，都是对的，再说重组慢病毒感染靶细胞后抽提DNA也没发生剪接啊，不知道是上面原因？真迷茫...如果质粒构建有问题的话怎么蛋白还有过表达呢，真是纳闷了
谢谢上面各位的解答，可是我那个重组质粒测过好几次序列了，都是对的，再说重组慢病毒感染靶细胞后抽提DNA跑PCR, 也没发生剪接啊，不知道是什么原因？真迷茫...如果质粒构建有问题的话怎么蛋白还有过表达呢，真是纳闷了
你要考虑一下RNA转录后加工的可能，也许该基因正常表达的时候其mRNA不会被如此地加工（即丢失86个碱基），而过表达后其mRNA丰度增加，通过某种机制引发RNA编辑，从而出现你所说的现象。如果这段缺失发生在非编码区，则不会对表达出来的蛋白的分子量产生影响，但可能会改变蛋白的表达水平。
谢谢上面这位仁兄，您的解释很有道理，就是这样的过表达细胞株可以用来检测功能吗，比如过表达后细胞株对增值、凋亡方面的影响；通过某种机制引发RNA编辑的话，有什么方法可以研究它是否发生了RNA编辑呢，因为我这个过表达慢病毒感染靶细胞，有些细胞株发生剪接，可有些细胞株就不会。
过表达后有一定的几率导致这种异常的加工，如果有正常的，就拿正常的细胞株做表型模型即可。
要证明有RNA编辑，只需把已知的涉及RNA编辑加工的酶敲低就可以了，如果仍有异常加工variant，可以考虑RNA自剪接的可能。
要证明有RNA编辑，只需把已知的涉及RNA编辑加工的酶敲低就可以了，如果仍有异常加工variant，可以考虑RNA自剪接的可能。
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