蛋白表达 求助

为了实验能够成功建议用T7启动子比较好。pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏蛋白lacI的基因,在插入目的基因后,lacI是失活的。表达时是需要IPTG诱导的。

可以换启动子的，没有T7可以用别的启动子

如果你的表达菌株无法使用T7启动子进行表达，想要更换启动子可能会影响表达效率。

在更换启动子时，需要注意以下几点：

1. 启动子的强度：选择一个适当的启动子来替代T7启动子。确保选用的启动子具有足够的强度，能够在你的表达菌株中产生足够的目标蛋白表达。

2. 载体兼容性：确保所选的启动子与DET系列载体兼容，并且可以正确组装。

3. 序列匹配：验证更换的启动子与目标基因的序列是否匹配，以确保启动子与目标基因的连接正确。

4. 启动子的调节性：了解所选启动子的调节性能。某些启动子可能对特定菌株具有较好的调控效果，而在其他菌株中可能不适用。

请注意，更换启动子可能会导致表达水平的降低或变化。不同的启动子可能在不同的表达菌株中表现出不同的效果。因此，在进行更换启动子的实验之前，最好在相关文献中查找类似的实验。

最好在实验之前进行小规模的预实验或对比实验，评估更换启动子后的表达效果。这样可以帮助你确定是否需要采取其他措施来提高表达效率，如优化培养条件、添加辅助蛋白或使用其他表达系统。