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我准备用人全血提取RNA,我先把全血离心,把血浆分装起来后,剩下的血细胞用红细胞裂解液裂解红细胞,最后将管低得到的白细胞直接不加任何东西冻在-80℃,以后提取RNA的时候拿出来直接加trizol吗?上述得到的血浆和白细胞要分别装在无酶的ep管里吗?如果装在没有用高压锅压过的不是无酶的ep管里直接冻起来可以吗?哪位知道的好心人帮忙解答一下,谢谢!
juyue2010
如果后边要提RNA,白细胞最好保存在RNA保护剂里。
汤姆卜丽波
RNA的话你最好用无酶的,或者压过的,其他的十分不推荐
loveliufudan
关于从全血中提取RNA的方法,建议如下:
1. 血浆和白细胞分离后最好装在无RNase的EP管中,因为常规管可能含有RNase,降解RNA。
2. 如果没有无RNase管,把管子高压消毒也可以灭活RNase,但效果可能不如无RNase管保险。
3. 白细胞收集后直接用TRI Reagent或者Trizol裂解更好,不需要冻存。因为冻存过程中细胞破裂,RNase易降解RNA。
4. 如果白细胞需要冻存,建议加入RNAlater等RNA稳定液,避免降解。快速冷冻也可减少RNA降解。
5. 血浆冻存同样需要快速,放无RNase管或高压消毒管,避免酶污染。
6. 提取时血浆需要去蛋白,白细胞直接Trizol提取即可。
综合来说,无RNase管子、快速处理和添加RNA稳定液是保证RNA完整的关键。
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