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求助|mimic和inhibitor瞬时转染miRNA,观察靶基因表达情况

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大白的汪汪

用mimic和inhibitor瞬时转染癌细胞后,跑了qPCR,mimic组的miRNA表达是升高的,而且是好几百倍,但是inhibitor组的miRNA却是升高的,但是查过资料说inhibitor不作用于miRNA,是作用于靶基因的,所以看下游的靶基因表达才能知道inhibitor有没有发生作用

但是,现在的问题是,我跑了WB之后趋势是反的,也就是mimic组的靶基因表达升高了,inhibitor表达下降了,这是什么情况

求助大神!!

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2 个回答

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土井挞克树

有帮助

先排除inhibitor组是否存在降解,这个实验特别容易造成基因降解,出现干扰结果

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loveliufudan

有帮助

这种情况可能有以下几种解释:

miRNA mimic和inhibitor转染效率不同导致差异。可能由于转染效率的不同,导致了mimic和inhibitor组的miRNA和靶基因表达差异。你可以通过检查转染效率来排除这种情况,比如使用共转染GFP的质粒来评估转染效率。

靶基因表达调控受到miRNA以外的其他因素影响。靶基因的表达可能受到多种因素的影响,包括转录因子、表观遗传学修饰等,所以miRNA mimic和inhibitor引起的表达变化可能不是唯一的因素。

检测误差导致的结果不一致。如果检测方法存在误差,那么可能会导致miRNA和靶基因表达的结果出现反向的情况。你可以尝试使用其他方法来验证结果,例如定量PCR或荧光定量PCR。

总之,为了确定miRNA mimic和inhibitor的作用,建议进行进一步的验证实验。除了检查靶基因的表达外,你还可以考虑检查细胞的增殖、凋亡和迁移等相关指标,来确定miRNA的作用。

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