【求助】盼回复miRNA inhibitor相关
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本人，研一，要转染miRNA inhibitor,请教前辈:
1、转染细胞一般inhibitor多少浓度？50nM?25nM?
2、而且本人转然后，需要做MTT，WESTERN等实验，这需要考虑转染效率吗？怎么来判断转染效率呢?
3、顺便问一下，抑制miRNA，就买个inhibitor和阴性对照就行了吧？还需要用阳性对照吗？
4、转然后分别多久做MTT、Western、克隆形成实验以及流失细胞仪测细胞周期凋亡等？
1、转染细胞一般inhibitor多少浓度？50nM?25nM?
2、而且本人转然后，需要做MTT，WESTERN等实验，这需要考虑转染效率吗？怎么来判断转染效率呢?
3、顺便问一下，抑制miRNA，就买个inhibitor和阴性对照就行了吧？还需要用阳性对照吗？
4、转然后分别多久做MTT、Western、克隆形成实验以及流失细胞仪测细胞周期凋亡等？
建议使用稳转，要不你的功能实验很难做下去，且不稳定。
miRNA转染一般需要做梯度的，25nm，50nm，100nm。。。
公司合成的miRNA一般会有一个带CY3的对照,这个可以用来确定转染效率,如果效率不高的话,建议用invitrgen的另外一个转染试剂,用来转RNA 的,名字记不清了,问业务员都知道的
一般转染后48-72小时就可以用了,这个也建议你不同时间收蛋白,看一下变化
我最早是在转染后4小时就分细胞,做MTT等了,结果也不错,也可以12小时以后分细胞
用不用阳性对照,看你实验需要,有的发文章是需要的,不过如果你的内源蛋白量已经很高的话,估计转染了microRNA前体后,效果也不会很明显
公司合成的miRNA一般会有一个带CY3的对照,这个可以用来确定转染效率,如果效率不高的话,建议用invitrgen的另外一个转染试剂,用来转RNA 的,名字记不清了,问业务员都知道的
一般转染后48-72小时就可以用了,这个也建议你不同时间收蛋白,看一下变化
我最早是在转染后4小时就分细胞,做MTT等了,结果也不错,也可以12小时以后分细胞
用不用阳性对照,看你实验需要,有的发文章是需要的,不过如果你的内源蛋白量已经很高的话,估计转染了microRNA前体后,效果也不会很明显
你好，请问你转染miRNA inhibitor以后怎么检测转染效率的，还有你是多久做MTT等相关细胞功能试验的？
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