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【求助】盼回复miRNA inhibitor相关

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本人,研一,要转染miRNA inhibitor,请教前辈:
1、转染细胞一般inhibitor多少浓度?50nM?25nM?
2、而且本人转然后,需要做MTT,WESTERN等实验,这需要考虑转染效率吗?怎么来判断转染效率呢?
3、顺便问一下,抑制miRNA,就买个inhibitor和阴性对照就行了吧?还需要用阳性对照吗?
4、转然后分别多久做MTT、Western、克隆形成实验以及流失细胞仪测细胞周期凋亡等?
建议使用稳转,要不你的功能实验很难做下去,且不稳定。
miRNA转染一般需要做梯度的,25nm,50nm,100nm。。。
公司合成的miRNA一般会有一个带CY3的对照,这个可以用来确定转染效率,如果效率不高的话,建议用invitrgen的另外一个转染试剂,用来转RNA 的,名字记不清了,问业务员都知道的
一般转染后48-72小时就可以用了,这个也建议你不同时间收蛋白,看一下变化
我最早是在转染后4小时就分细胞,做MTT等了,结果也不错,也可以12小时以后分细胞
用不用阳性对照,看你实验需要,有的发文章是需要的,不过如果你的内源蛋白量已经很高的话,估计转染了microRNA前体后,效果也不会很明显
你好,请问你转染miRNA inhibitor以后怎么检测转染效率的,还有你是多久做MTT等相关细胞功能试验的?

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师兄微信号:shixiongcoming

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