【求助】miRNA inhibitor 转染后和miRNA转染效果相近,请教原因。
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我们实验用miRNA转染后,下调了目的基因,但是转入miRNA inhibitor后,目的基因水平也是下调的,并且下调水平和miRNA相近,这个是什么原因造成的?难道是inhibitor凑巧也抑制了别的基因了吗?或是别的原因,请大哥大姐们帮帮忙啊,谢谢啦!
自己顶一下,呵呵
你的细胞转染效率如何?转染miRNA后干扰效率如何?如果转染效率低的话干扰效果,miRNA的inhibitor的封闭效果都不会好。
inhibitor 转染效率在70%左右,转染后细胞的mirRNA确实明显下降了,但是目的基因却也是下降的,现在都快被搞晕勒 。
公司有没有送错货
你自己稀释时候有没有弄错
你自己稀释时候有没有弄错
反复核对过了,并且inhibitor转染后,miRNA下降了,和预期相同,但接下来的目的基因也是下降的。难道这个inhibitor既抑制了miRNA,同时也抑制了上游的哪个基因,不知道怎么搞的,哎!
需要通过什么实验能够解决这个问题?请大哥大姐们帮帮忙!万分谢谢!
你的目的基因是putative的还是real的?
这个是已知基因,在其他组织细胞中研究的不少。
继续求助!!!
是否做了阴性对照?转染流程一样,只是转染中不添加转染序列,看一下转染过程本身对细胞的影响。一般来讲现在的inhibitor成品试剂都是一对一的。呵呵,当然不排除货物送错的可能。
一般在做转染时分三个组,一个当然是转染序列,第二个是NC对照组(加入转染试剂,但不加siRNA),第三组就是mock(不加转染试剂,只加入siRNA),然后三组做比较,希望楼主能找到原因!
请问你的miRNA inhibitor 在什么公司合成的啊?需要构建载体吗?因为我看广州锐博的一种miRNA antagomir 据说不用构建载体,也无需转染,直接加入培养基就行,但是比较贵,所以想问问其他的方法
楼主你好,请问后来这个情况怎么解决了呢?我的实验也是出现这种现象,加了mimic会下调靶基因,加了inhibitor也下调了靶基因,我快晕了。。。。
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