做了原核表达，跑了SDS-PAGE但是看不出来差异，所以做了个WB但是全是非特异条带，是怎么回事

笋干CAU

2022-07-06

载体是pET28,大肠杆菌是BL21(DE3)使用LB培养基。天然目的蛋白大小83kDA,融合蛋白88kDA。 1空载，2诱导前，3-5IPTG浓度梯度，6诱导前，7-9IPTG浓度梯度。

冷泉港蛋白

2022-07-30

有帮助

第一张图在100kd位置，是有条带表达的，表达量不高，但有

第3张图，28a载体的标签是his，his抗体的特异性很差，所以不要用his去做wb

确定是上清还是包涵体后，摇个大样，过下柱子

dxy_771zvlc

2022-07-06

有帮助

蛋白是否可溶呢？SDS-PAGE的样品是上清还是沉淀。如果是上清，那有可能蛋白在包涵体内。如果是上清，看着染色胶蛋白应该是有表达的，WB可能没有杂交出来。

bamboopiggy

2022-07-06

有帮助

感觉你还是没有诱导出来，一般考染就能看出来表达量高的。如果考染没有，说明你的表达有问题。

申东熙老伯

2022-07-06

有帮助

你这个结果很显然目的蛋白就没有表达，空载和对照都没差异，建议重新构建质粒重新转化。

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