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原核表达中,IPTG诱导过程中,有必要摸诱导温度吗,一般最适多少度啊?

相关实验:原核细胞体外翻译系统

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三人行3ZZA

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3 个回答

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dxy_gwrp7ndq

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建议室温和37度,做时间曲线(0,1,3,5,过夜),IPTG用0.2mM,电泳检测

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迟C迟

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一般的诱导温度都在30度到37度之间,温度越低,可溶性表达的比例越高,有时为了使可溶性表达达到最大化,甚至在15-20度内诱导,这时菌体生长慢,诱导时间肯定要变长,最长可以过夜诱导。

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dxywode

有帮助

一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的IPTG(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大小、性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻找合适诱导时间,如果不想这么麻烦,直接过夜诱导。诱导温度的话一般20-30℃的都有,我同学有次用16℃诱导出来的。

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