从胚胎中提取RNA时，应注意哪些原则？

1. Trizol试剂含有苯酚，具有毒性和刺激性，注重操作。

2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注重配带手套，样品尽可能盖严。

3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低最后得率，因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。

1.去膜要完全。2匀浆要条件一致。裂解时间可以适当延长。3.sevag抽提水相，2次。

1.RNA在细胞内极易降解，样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理（液氮速冻）；样本出现多次反复冻融后，RNA得率会严重下降，也会导致RNA降解；RNA提取环境要保持无RNA酶污染；

　　2.RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解，建议实验过程中注意更换实验手套，使用所有耗材应该均无RNA酶的一次性耗材；

　　3.试剂盒中BufferEB（RNA专用）中含有少量EDTA，可能影响下游实验，使用时适当稀释，如果用其他洗脱液洗脱，要确保PH>7.5，PH过低影响洗脱效率；

　　4.离心柱漂洗完成后，尽可能烘干柱膜上残留乙醇，残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果；柱膜也不建议过度干燥，没有乙醇味道残留最好，如果过度干燥可能影响RNA溶解；如果A260/230值过低，说明样本提取过程中漂洗不彻底，有盐离子残留，建议增加漂洗次数；

　　5.对于RNA提取，A260/280<1.9说明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脱样本时没有使用BufferEB，而使用ddH20（确保无RNA酶），比值或偏低，因为Ph值会影响吸光值，并不表示样本纯度低；

　　6.如果提取的样本RNA发生严重降解，可能是由于裂解液没能完全灭活样本中RNA酶，建议增加裂解液使用量（具体参见说明书）或者降低样本初始量；

1、研磨组织样本时，要避免样本发生冻融，防止样本RNA降解；

2.分层以后，在取上层水相时千万要小心，手不要抖，心不要慌，拿移液枪要稳，吸取上层水相时尽量要缓慢匀速稳定地去吸取液体，枪头也要跟随液面缓缓下移。吸取液体过快，导致液体流动加快从而带动中间层，当吸取到中间层时，可能会导致我们最后提取的RNA有蛋白污染。

3：操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。手指和呼吸是重要的外源酶的来源。所以童鞋们做RNA抽提的时候，还是要全副武装起来。这对自己也是一种保护措施。

4：实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。离心管和枪头要用DEPC处理过，单纯的消毒灭菌可不行呀。移液器和实验台面等要用75%的酒精擦过。

5：实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free。