科研_小白
这几天做microRNA实时定量pcr,标准曲线按比例稀释,分别是1:5/1:25/1:125,结果是原液ct值最小,前提是加样顺序都对,已做了2遍,结果是一样的,有相同经历的小伙伴可以分享一下经验吗
z流沙z
原液浓度高,ct值小,这是正确的,稀释后ct值变大才符合
loveliufudan
这种情况可能是因为标准曲线的稀释过程中发生了一些误差。如果标准曲线的制备过程有任何误差,那么标准曲线的斜率和截距会发生变化,从而影响定量的准确性。
另外,你可以尝试使用更多的稀释比例制备标准曲线,比如1:10、1:50和1:100等。这样可以更加准确地确定最佳的稀释倍数。另外,在进行实时PCR时,还要注意实验条件的一致性,比如反应体系的配制、反应温度和时间等,以确保结果的准确性。
毛利小五郎的徒弟
那你可能是稀释的浓度掌握的不对,可以先把稀释倍数调整一下
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