Wbalaba
跑的内参应该还不错,每次都是15-17,目的跑不出来,想问问怎么回事,心态真的要崩。换过引物(但是同样序列)。
Topmicro
建议重新查阅几篇文献,看看同一目的基因的引物序列是否有差异,如果有的话更换其他序列进行检测。
土井挞克树
可能是目的基因表达过低,达不到qpcr检测量。
loveliufudan
有以下几种可能性:
目的基因表达量太低:可能是因为该基因在您的样本中表达量太低,不足以被检测到。您可以尝试提高模板的浓度或者扩增周期数,或者使用更灵敏的检测方法。
引物设计问题:您说已经更换了相同序列的引物,但仍然无法扩增出目的基因。可能需要重新设计引物,确保引物的特异性和灵敏度。
检测条件问题:检测条件的设置可能需要调整,例如温度,时间等等,这可能会影响PCR扩增的效率。您可以尝试调整PCR扩增的条件,例如提高退火温度等。
样品污染:可能存在样品污染,例如RNA质量不佳或者被污染等等,这可能会影响PCR扩增的效率。您可以尝试更换RNA提取试剂盒、提高RNA纯度等。
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