qpcr时，三次生物学重复之间ct值差很多，连带着内参也差很多，但是技术重复相差不大，是不是cdna质量不好或者稀释太大了

保证每次稀释比都差不多就可以了，可能你试剂或者技术还不太好

样品处理的问题，反转录各样品不平行

一般是cdna稳定性差，或者是样本的稳定性差

以下是可能的解决方案：

确认RNA质量：确保您使用的RNA质量好，并且经过良好的保存和处理，例如使用RNase-free工具和试剂，并使用RNA纯化试剂或者RNAeasy kit等专业的RNA提取试剂。

调整RNA浓度：如果您的RNA稀释过大，可能会导致qPCR信号弱，因此您可以适当调整RNA的稀释倍数，以使其适合您的实验需求。

样品制备过程：确保样品制备过程一致，比如反应体系、反应管的选择、RNA纯化方法等。

检查实验设计：确保您的实验设计和操作无误，包括逆转录反应和PCR扩增的温度、时间、剂量等参数，同时可以考虑优化qPCR实验参数，如优化引物和探针等。

数据分析和归一化：在分析qPCR结果时，一定要使用正确的归一化方法，例如内参基因。此外，您可以使用统计学方法来分析结果，以确认CT值的方差是否在可以接受的范围内。

可能是cdna的问题，逆转录的酶如果反复冻融，或者使用的时候没有保持低温是会造成这样的结果的。可能是内参CT值从16升升高到26，这个情况可能会导致你的结果出现完全相反的趋势。