组织样品如何提取mRNA

（一）动植物总RNA提取-Trizol法 　　

1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 　　

2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。 　　

3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。 　　

4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。　　

5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。　　　　（二）mRNA提取 　　

1、用0.1mol/L NaOH悬浮0.5-1.0g oligo(dT)纤维素。 　　

2、将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱中或装入填有经DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5-1.0ml，用3倍柱床体积的灭菌水冲洗柱床。 　　

3、用1x柱层析加样缓冲液冲洗柱床，直到流出液的pH值小于8.0。　　

4、将（一）中提取的RNA液于65℃温育5分钟后迅速冷却至室温，加入等体积2x柱层析缓冲液，上样，立即用灭菌试管收集洗出液，当所有RNA溶液进入柱床后，加入1倍柱床体积的1x层析柱加样溶液。　　

5、测定每一管的OD260，当洗出液中OD为0时，加入2-3倍柱床体积的灭菌洗脱缓冲液，以1/3至1/2柱床体积分管收集洗脱液。 　

　6、测定OD260，合并含有RNA的洗脱组分。 　　

7、加入1/10体积的3M NaAc(pH5.2)， 2.5倍体积的冰冷乙醇， 混匀， -20℃30分钟。 　　

8、4℃下12000g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗 涤沉淀，4℃下12000g离心5分钟。　　

9、小心弃去上清液，沉淀空气干燥10分钟，或真空干燥10分钟。 　　

10、用少量水溶解RNA液，即可用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并贮存于-70℃）。 　　

可以用液氮的，加液氮磨碎，我们组织也是这样提取的，没有问题

如果实验室没有匀浆机，可以考虑使用其他机械方法，例如超声波处理或用切割刀切碎样品。也可以尝试使用液氮法或磨细法等方法进行样品破碎。需要注意的是，不同的方法可能会对mRNA的完整性和质量产生不同的影响，因此需要根据具体实验情况选择适合的方法。

需要注意的是，在提取组织中的mRNA时，还要避免RNase污染，使用RNase-free试剂和工具，并在合适的温度和时间内保存和处理样品，以确保mRNA的完整性和质量。