多重qpcr,FAM通道的荧光强度明显高于其它通道

我更倾向于背景调节的问题，可以把基线调宽再做

如果FAM通道的荧光强度明显高于其它通道，这可能是由于以下几种原因之一或多者综合引起的：

1.引物的不平衡结合，导致FAM通道的扩增效率高于其它通道。

2.FAM染料的高效率荧光性质，导致FAM通道的荧光强度高于其它通道。

3.FAM染料比其它染料更易穿过细胞膜，导致FAM通道的荧光强度高于其它通道。

4.实验条件（如温度或pH值）导致FAM通道的扩增效率高于其它通道。

解决方案:

1.使用同等浓度的引物，并重新进行扩增，检查各通道的扩增效率。

2.更换其他荧光染料，检查各通道的荧光强度。

3.在扩增过程中保持实验条件的稳定性，如温度，pH值等。

4.分析结果时使用正确的标准品。

1、在选择荧光基团时要注意避免荧光基团的发射光谱之间的相互干扰。

2、不同荧光基团的荧光强度有高有低。FAM是荧光强度相对较高的一组，所以我们更倾向于将其安排给表达相对较低的靶基因，而荧光强度相对较低的一组可以用来检测表达相对较高的看家基因。这样就达到了放大曲线平台的目的，熔解曲线会更漂亮。