反转录失败，p不出条带，求指教！

大海带

2022-12-22

这个是rna的琼脂糖凝胶电泳图，

预变性：oligo dt（1ul)和n6(0.5ul)70℃，10min，4℃，2min

反转录：m-mlv，RRI，10mm dntp，5x mlv buffer

42℃，60min，70，10min

选择实验室用的植物actin的引物，做pcr，30循环，跑胶

前十二个是我的cdna跑胶图，依次是经过不同处理的根茎叶，根茎叶，根茎叶，根茎叶。

为什么根里的rna没有发生降解，但是用它反转录出来的cdna，pcr之后就跑不出来我的actin条带？

曙光karry

2023-01-07

有帮助

1. cdna 梯度稀释3-4个浓度 2换一个反转录的盒子做一下

bamboopiggy

2022-12-25

有帮助

是不是经过你的处理后，植物的actin在这里不适合做内参？

dxyc42u

2022-12-24

有帮助

第一步有没有迅速降温，去除RNA的二级结构？

土井挞克树

2022-12-22

有帮助

有可能是反转录的cdna重复区域太多或者存在二聚体。