bamboopiggy
你用阳参了么? 1.扩增的酶有没有问题,2,模板有没有问题,3,加没加引物,4,扩增的程序,尤其是annealing temperature和extension time是否正确?
毛利小五郎的徒弟
最常见的问题是你的上样量太小。
huarenqiang5
主要考虑以下几点:
1、模板含有杂质。
2、变性温度是否准确。
3、反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加 Taq 酶以前,将反应体系 95℃ 加热 5~10 分钟。
4、引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。
5、引物错误。利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。
6、DNA 凝胶电泳时加入阳性对照,确保不是 DNA 凝胶和 PCR 程序的问题。
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