可变剪接设计引物

Gene，搜索

选择相关的

不同的isoform：

点击其中一个isoform，复制全部序列到snapgene

把四个isoform全部保存：

点击第一个进去，进行编辑：

首先在NCBI GENE里找到CDS（编码区），复制，ctrl+F到snapgene里，Features-add feature，命名为COS,其他三个isoform复制进来：

这里的红色就代表外显子跳跃事件，我们将外显子跳跃事件的碱基复制，add feature为exon skipping，发现这个外显子跳跃在CDS之外，说明这个SE事件不会影响编码蛋白的改变。

再做STAG2的，前边步骤都相同，ZFAND4的SE事件在CDS内，将SE事件标注为绿色：

将exon的序列，exon前边100-200bp的序列以及exon后边100-200bp的序列copy到primer3网站上，格式为:exon前边100-200bp的序列[exon]exon后边100-200bp的序列:

点击pick primers，可以得到前边和后边的两个引物

打开ncbi，首先在Nucleotide中输入基因名和物种名，选择打开以下的连接，点击 Graphics，查看已发现的转录本，还可以结合转录组测序云平台，查看测序出的可变剪接。点击Tools查看序列信息。此序列为NCBI上提交的反向互补序列。